Odyssey DLx イメージングシステム

Odyssey DLxでは、700nmあるいは800nmの近赤外蛍光波長を用いて、イメージングを行います。近赤外蛍光波長でのイメージングは、可視蛍光波長すなわちRGB（Red／Green／Blue）でのイメージングに比べて自家蛍光が低く、シグナルノイズ比の高い画像を得られるという利点がございます。

ブロットのイメージング

ウェスタンブロッティング等で用いるメンブレンは、PVDFメンブレンとニトロセルロースメンブレンを問わず可視領域の蛍光波長（400～650 nm）で強い自家蛍光を持ちます。

そのため、可視蛍光波長では目的とするタンパク質を十分な感度で撮影するのが困難です。

一方で、Odyssey DLxで用いる近赤外波長領域は、メンブレンの自家蛍光に由来するバックグラウンドが低いことが知られています。

そのため可視蛍光と比べてはるかに高感度に目的タンパク質を検出することが可能です。

※ ハウスキーピングタンパク質等の発現量が非常に大きいタンパク質は可視蛍光でも検出可能です。

細胞あるいは組織サンプルのイメージング

可視波長領域で強い自家蛍光がみられるのは、細胞、組織、臓器のイメージングでも同様です。

近赤外蛍光領域でイメージングを行うOdyssey DLx システムは、In-Cell Western アッセイや臓器のex vivo イメージングなどのアプリケーションでも、シグナルノイズ比の高い高感度なイメージを得られる利点がございます。

なぜ蛍光ウェスタンブロット？

蛍光ウェスタンブロット法は、以前から定量ウェスタンブロットに適した検出方法として知られていました（ 参照）。この蛍光ウェスタンブロット法が近年再び脚光を浴びています。

蛍光ウェスタンブロット法は、化学発光ウェスタンブロット法よりも定量性と再現性に優れ、信頼性の高い定量ウェスタンブロットデータを得ることができる実験手法です。

そのため、創薬研究やシグナル伝達研究をはじめ、実験データに正確性と確実性が求められる分野を中心に、世界中の多くの研究者に好んで使われてきました。

さらに近年では、トップジャーナルを中心に定量ウェスタンブロットデータの論文投稿ガイドラインがアップデートされ、従来よりも厳正な実験を行うことが求められています。蛍光ウェスタンブロット法は、その最新の論文投稿規定を満たしやすい実験手法として注目を浴びています。

化学発光法（ケミルミ法）はシグナルの検出に酵素反応を利用します。そのため、試薬との反応時間や温度など様々な要因によりシグナル強度が変動し、サンプル間での発現比を正確に反映するデータを再現性良く取得するのが困難です。 

蛍光法は、シグナルの検出に蛍光標識二次抗体を使用し酵素反応に依存しないため、サンプル間での発現比を正確に反映する常に安定したバンドシグナルを得ることが可能です。

また、化学発光法で問題となる、基質の枯渇に伴う高発現タンパク質のサチュレーション（白抜け）も、蛍光法なら回避することができます。

> 6桁のダイナミックレンジによる信頼性の高い画像データ取得

Odyssey DLxシステムは>6桁の広いダイナミックレンジを持ちます。

そのため、弱いバンドと強いバンドを1回のスキャンで常に同時に撮影することができます。

実験毎に適正な露光設定（露光時間やゲイン設定）を探す必要がなく、Increment 撮影（逐次露光）やAuto-Exposure（自動露光調整）も不要です。

すなわち、Odyssey イメージングシステムを用いると、撮影毎に露光設定を変えずに常に一定の条件で撮影が可能です。蛍光ウェスタンブロット法の利点の1つである再現性の高さを活かして、さらに信頼度の高いデータを取得することができます。

サチュレーションを回避して定量直線性の高いデータを取得

>6桁のダイナミックレンジを持つOdyssey イメージングシステムは、撮影装置のダイナミックレンジの限界に起因するバンドのサチュレーション（Detector Saturation）も起こりません。

そのため、『定量直線性に優れる』という蛍光ウェスタンブロット法のもう1つの利点も最大限に生かすことが可能です。

Odysseyシリーズは、広いダイナミックレンジ（>6桁）をもつため、蛍光ウェスタンブロット法の利点をさらに活かすことができます。

蛍光ウェスタンブロット法の2つめの利点はマルチプレックス検出です。

蛍光ウェスタンブロット法では、一次抗体の動物種を変えることで、複数の異なるタンパク質を1枚のメンブレンから同時に検出することができます。

検出対象の2つのタンパク質の分子量が近い場合でも、ストリッピングとリプロービングを行うことなく、同時に検出することができます。

定量性という点では懐疑的であったストリッピング実験を行う必要がありません。

ハウスキーピングタンパク質（Actin, Tublin, GAPDHなど）は万能でしょうか？

近年、サンプル間や処理間でハウスキーピングタンパク質の発現が生理学的に変動する例が多く報告され、ハウスキーピングタンパク質に変わるロバストなインターナルコントロールとしてメンブレン上の総タンパク質染色を用いたノーマライゼーションが推奨されています。

蛍光ウェスタンブロット法は、この総タンパク質染色によるノーマライゼーションに適した実験手法です。

In-Cell Western アッセイは、Odyssey シリーズの中で、蛍光ウェスタンブロットと並んで人気のアプリケーションです。

培養細胞サンプル間のタンパク質発現解析を、96あるいは384ウェルプレートを用いてハイスループットに、しかもセルベースで行うことが可能です。

創薬における標的同定や薬効薬理研究、シグナル伝達研究、ワクチン開発／ウイルス感染症研究、医薬品候補分子の標的結合特異性試験などに特におススメの実験手法です。

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In-Cell Western アッセイの論文例を検索する

Odyssey DLx イメージングシステムは、ウェスタンブロットメンブレンからタンパク質ゲル、マルチウェルプレート、組織切片スライド、あるいは実験動物の臓器のイメージングまで、1台で幅広い種類のサンプルのイメージング実験が可能です。

• メンブレン： 同時に最大6枚スキャン可能（ミニブロットサイズの場合）
• ゲル：同時に最大9枚スキャン可能（ミニゲルサイズの場合）
• プレート：同時に最大6枚スキャン可能
• スライド：同時に最大30枚スキャン可能

Odyssey DLx イメージングシステムには、信頼性の高い数値化解析を誰でも簡単に短時間で実現することができる次世代の画像解析ソフトウェア Empiria Studioが標準で付属いたします。

これまでの「バンド強度を数値化するだけのソフトウェア」とは一線を画す新しいタイプの画像解析ソフトウェアです。

画像解析に不慣れな方から精通した方まで、エキスパートレベルの画像解析をシンプルな操作で簡単に行うことが可能です。

定量ウェスタンブロット解析

• 
  最新の論文投稿規定に準拠した定量ウェスタンブロット画像解析に求められる様々な機能を搭載
• リニアレンジの解析、ハウスキーピングタンパク質の検証など定量性の確保に重要なバリデーション解析機能を搭載
• バックグラウンド補正など主観に頼りがちだった解析ステップを先進のアルゴリズムで自動化、再現性の高い定量解析が可能
• 総タンパク質補正におけるレーン強度を正確に解析

In-Cell Western 解析

• 
  ターゲットタンパク質の定量解析に加えて、アッセイ条件最適化のための各種の画像解析機能を搭載
• アッセイ構築ガイドと合わせて使用することで、In-Cell Westernアッセイが初めての方でもアッセイ最適化を効率的に実行可能
• 解析者間差や実験間差の少ない再現性の高い定量結果を取得可能
• 実験結果のグラフ化までソフトウェアが実行

近赤外蛍光ウェスタンブロットに関しては、 近赤外蛍光標識二次抗体（IRDye標識二次抗体）、 ブロッキングバッファー、 抗体希釈液、 総タンパク質染色ノーマライゼーション試薬、 分子量マーカー、 蛍光ウェスタン用ストリッピングバッファーなど、ほとんどの実験ステップの試薬をラインナップしています。

In-Cell Western アッセイに関しては、 近赤外蛍光標識二次抗体（IRDye標識二次抗体）、 ブロッキングバッファー、 抗体希釈液、総細胞染色ノーマライゼーション試薬（ CellTag 700と CellTag 520）、In-Cell Western アッセイキット（ ICW Kit Ⅰ、 ICW Kit Ⅱ、 ICW Kit Ⅲ、 ICW Kit Ⅳ）、 推奨96ウェルプレートなど、様々な試薬および消耗品をご用意しています。